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Du gène à la protéine

CNRS Formation Entreprises
Résumé
5 Jours
1 700 - 1 800 EUR
Particuliers (Inter)
Prochaine session : 04/11/2019 - Toulouse
4,5 (2 Avis)

Objectifs visés

- Acquérir les bases de la biologie moléculaire et de la biochimie des protéines pour produire, extraire et analyser les protéines recombinantes
- Savoir utiliser le logiciel Clone Manager pour réussir son clonage et la production de protéines in silico
- Savoir choisir la méthode appropriée pour détecter les protéines recombinantes

Contenu

Cours (17,5 h)
- De la cellule au gène : rappels sur le transfert de l'information génétique ou expression d'un gène (transcription, traduction) ; notions de mutations
- Les éléments nécessaires à la surexpression d'un gène : choix du vecteur et choix de la cellule hôte
- Rappel sur l'amplification de l'ADN insert par PCR
- Méthodes de fusion de gènes et d'étiquetage de protéines : par clonage / étiquetage d'un gène dans un vecteur par la méthode des enzymes de restriction, par la méthode « In-Fusion », par recombinaison homologue et par la méthode « CRISPR-Cas9 »
- Méthodes de mise en évidence de l'expression génique ou de la production de protéines recombinantes, détections par Western Blot (principe de l'immunodétection par chimioluminescence, par la phosphatase alcaline (PhoA) et par fluorescence)

Travaux pratiques et dirigés (17,5 h)
- Travaux dirigés sur les PCR et sur le clonage en respectant le cadre ouvert de lecture : utilisation du logiciel « Clone Manager Vs 9 »
- Mise en culture des cellules bactériennes en conditions stériles et induction de l'expression d'un gène par l'IPTG
- Extraction des protéines totales, dosages, dépôts sur 2 gels et migration, visualisation des protéines sur 1 gel, transfert des protéines du 2ème gel sur membrane nitrocellulose, visualisation des protéines sur membrane
- Identification de la protéine recombinante par Western Blot, utilisation d'anticorps secondaires couplés à la PhoA

Formation qualifiante/diplômante/certifiante?

Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

Moyens Pédagogiques


Il est demandé aux stagiaires de venir avec leur propre ordinateur portable avec les droits administrateurs afin de pouvoir installer en début de stage les logiciels nécessaires à la formation.

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Avis

Pierre L., grand groupe pharmaceutique
(5)
La responsable donne l'envie d'apprendre, elle transmet sa passion.
Meriem K., universitaire.
(4)
Excellent stage de grande qualité. J'ai apprécié la qualité et la passion de l'intervenante. J'ai également appprécié l'intéractivité durant toute la durée du stage.

Contact

CNRS Formation Entreprises

Avenue de la Terrasse
91190 Gif-sur-Yvette Cedex

 Afficher le numéro
cnrsformation.cnrs.fr

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