Date de début
Objectifs visés
La formation, au travers de cours théoriques et d’applications pratiques portant sur des exemples concrets, abordera les différents types de transferts de gènes dans les cellules eucaryotes utilisés dans les laboratoires. Elle permet à la fois d’avoir une vision globale de ces différentes techniques ainsi que leur mise en application en fonction des différents types cellulaires utilisés. Cette formation permet ainsi de comparer les différentes techniques entre elles mais également entre différentes lignées par exemple non adhérente (jurkat) ou adhérentes (C2C12, HeLa). Enfin, cette formation permet également d’aborder les notions de différents systèmes (rapporteurs GFP, luciférase) pour suivre le transfert de gènes dans ces cellules mais aussi le maintien de ces gènes après transfert
Contenu
Organisation de la formation
Partie théorique (1h/jour)
Promoteurs eucaryotes, structure, fonctionnement
Généralités
Les techniques de transfert de gènes, adaptation aux différents types
cellulaires
Les différentes méthodes de transfection
Vectorologies virales et non virales
Stabilisation de gènes
Les différents marqueurs de sélection
Stratégies de maintien des clones stables
Gènes rapporteurs et méthodes de mesure
Partie pratique (6h/jour)
• Optimisation et comparaison de différentes techniques de transfert
de gènes :
Électroporation et transfection à la lipofectamine ou au jet prime.
Utilisation de trois lignées cellulaires : une non adhérente (Jurkat) et
deux adhérentes (C2C12 et HeLa) et une lignée primaire (myoblastes
de souris)
• Utilisation de différents gènes rapporteurs (GFP et Luciférase)
• Analyse d’une sélection de clone de lignée inductible (Tet-on)
• Etudes d’une voie de transduction du signal NFkB
Des modifications mineures peuvent être apportées sous la responsabilité de l’encadrement pédagogique
Du 5 au 8 octobre 2020
4 jours / 28 heures
2150 €
(TVA 0% incluse)
Contrôle des connaissances
MOYENS PERMETTANT DE SUIVRE L’EXECUTION DE L’ACTION ET D’EN
APPRECIER LES RESULTATS:
Liste d’émargement
Questionnaire de satisfaction
MODALITES D’EVALUATION:
Attestation de formation délivrée par l’Université
Aménagements particuliers
MOYENS PEDAGOGIQUES ET TECHNIQUES D’ENCADREMENT:
Ressources humaines :
Enseignante de l’Université Paris Diderot présente pour guider les participant.e.s et répondre à leurs questions tout au long de la formation.
Aide technique pour le bon déroulement de la partie pratique
(préparation des postes de travail…)
Possibilité de contact, via adresse email, pour des conseils a postériori en rapport avec le transfert de gènes.
Aide administrative pour fournir les informations nécessaires au bon déroulement de la formation.
Ressources matérielles :
Appareils et salles adaptés aux expériences dédiées (PSM, Microscope à Fluorescence, Luminomètre…)
Supports pédagogiques ainsi que les résultats obtenus au cours du stage remis sous format PDF sur clé USB
Public Cible
Prérequis
Technicien.nes, ingénieur.e.s et chercheur.e.s des entreprises et des collectivités dans le domaine des sciences du vivant.
Conditions d’ouverture : 6 inscriptions minimum et 12 maximum.
Pré-requis
Avoir des notions de culture cellulaire
Droits de scolarité
2150 €
Compétences visées
Connaitre et comprendre les différentes techniques utilisées dans les laboratoires pour le transfert de gènes dans les cellules eucaryotes (transfection, électroporation, virus) ainsi que l’intérêt scientifique de chacune d’entre elles.
Mettre en oeuvre et appliquer un protocole de transfert de gènes par des méthodes non virales.
Savoir identifier les paramètres à ajuster pour optimiser un transfert de gènes en méthode non-virale en fonction du type cellulaire étudié.
Obtenir les bases de l’utilisation de gènes rapporteurs luciférases par l’exemple de l’analyse d’une voie de transduction du signal.
Avoir des connaissances théoriques sur l’établissement de lignée stable et leur criblage
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